植物中黄酮类化合物的提取常采用超声波提取法、微波辅助提取法、酶解法等，由于提取得到的粗提液中含有较多糖类、无机盐、蛋白质、脂类、色素等非黄酮类化合物成分，因而粗提液往往需要进行预处理以提高目标物的纯度，否则就会影响产品的稳定性和使用效果。常用的分离纯化方法有柱层析法、大孔吸附树脂法、薄层层析法、高速逆流色谱法、双水相萃取法、膜分离法等。

1 柱层析法

柱层析法是应用比较早的从天然产物中分离黄酮类成分的有效方法，填料吸附剂以硅胶、纤维素、聚酸胺和葡聚糖凝胶为主，具有分离量大、操作方便等特点。目前常见的柱层析法主要有聚酸胺柱层析法和硅胶柱层析法。张金杰等采用聚酸胺柱色谱分离野菊花中的蒙花普，使得蒙花普的纯度由原先浸膏的2.36%提高到12.27%，提高了5.2倍左右，因而聚酸胺对野菊花中的蒙花普富集效果较好。田宜柏采用聚酸胺柱层析法对薇菜黄酮提取液进行分离纯化，当采用70%乙醇以200 mL/h的流速洗脱，洗脱液的黄酮含量达到了14.45%徐双双等对荷花中3种黄酮类化合物采用硅胶柱色谱法结合高速逆流色谱法进行分离纯化，得到榭皮素_3_p_R_D_葡萄糖醛酸普(I)、杨梅一3-0-(3-D-葡萄糖普III)和紫云英普VIII)，纯度分别为97.0% , 95.4% ,96.3% ,显示了极佳的分离纯化效果。

2 大孔树脂吸附法

作为一种有机高分子共聚体，大孔吸附树脂具有吸附容量大且能力强、选择性好、绿色高效、易于工业化等特点，因而在黄酮分离纯化领域拥有重要地位，其分离效果一般与树脂种类和结构、目标物的浓度、吸附与洗脱速度等因素有关。使用大孔树脂吸附法也存在一些困难，如吸附前需要对树脂进行预处理，需要优选吸附剂种类及吸附、脱附条件，树脂进行再生处理时间长。目前，常用的大孔吸附树脂的型号有D101,DA-201,AB-8等。陈修文等研究了不同型号大孑喇脂纯了镌良杏叶总黄酮的工艺条件，通过选用D101树脂将纯度为8.51%银杏叶黄酮提取原液提纯到56.89% ,该工艺可有效地用于银杏叶黄酮的分离富集。另有研究表明，可选用AB-8树脂对薄荷提取液进行吸附处理，解析液经浓缩冷冻干燥后，测得干粉中薄荷总黄酮含量为90.35%陈丽春等采用AB-8树脂对洋甘菊中总黄酮进行了纯化，结果表明AB-8树脂对洋甘菊供试品的吸附率达62.5% ,解吸率为68%、回收率达61 %，此法被证明有利于洋甘菊总黄酮工业化生产应用。

3 薄层层析法

在黄酮类化合物的研究中，薄层层析法常用于对黄酮物质种类鉴别、提取液的分离纯化或含量测定，利用微乳液或结合其他技术可提高该法的灵敏度和分离效率。薄层层析法因具有分离速度快、操作易、结果准确等优点而得到了快速发展。李升锋等以含水量70%的十二烷基硫酸钠一正丁醇一正庚烷一水微乳液为展开剂，在聚酸胺薄膜上使桑叶黄酮类化合物得到了分离，产生了12个斑点，该法优于常规薄层层析法。余婷婷等用颜色反应、薄层层析与紫外扫描光谱3种方法对玉米须黄酮类化合物进行初步分析，得出玉米须黄酮的主要成分是木梅草素、芹菜素与刺芒柄花素。

4 高速逆流色谱法

高速逆流色谱分离法是一种新型高效的液一液分配色谱技术，它不用固相载体作固定相，具有分离效率高、重现性好、适用范围广且能连续自动等优点，对于许多种天然活性组分的分离都具有较好的分离效果。李倩等用高速逆流色谱分离纯化新疆圆柏枝叶中的黄酮类成分，首次从圆柏属植物中分离得到了榭皮素-3-0-(6"-0一乙酸基)_R_D_毗喃葡萄糖普。孙常磊等采用高速逆流色谱法分离纯化灯盏细辛中的黄酮类化合物，结果从粗提液中分离得到黄答素、木犀草素、榭皮素和芹菜素4个黄酮类化合物，纯度分别为94.6%,92.5%,98.2%,97.5%o

5 双水相萃取法

双水相萃取技术是一种高效温和的生物分离技术，因其具有成本低、易操作、易保留生物活性、萃取分相时间短等优点而被广泛应用于天然活性成分的提取与精制。目前，很多研究表明，双水相萃取技术在黄酮类化合物的分离纯化中已经取得了较好的分离效果，有望成为一种新型的黄酮类化合物的分离纯化方法。丁霞等的研究表明，采用丙酮-I}=HPOQ双水相萃取体系分离纯化大蓟总黄酮，在室温25℃、丙酮体积分数70% , I}=HPO、的质量浓度0.24 g/mL,pH值为8.0的条件下，大蓟总黄酮的萃取得率达%.8%，黄酮浸膏纯度达89.8% ,表现出较佳的纯化效果和较高的萃取效果。池汝安等}is}研究了葛根总黄酮在不同乙醇一无机盐双水相体系中的萃取效果，结果表明乙醇/磷酸氢二钾双水相系统为最佳体系，在最佳萃取条件下葛根总黄酮在两相中的分配系数达35.99，萃取率高达99.23 %

6 膜分离法

膜分离法是利用膜具有选择透过性，在外力(压力差、浓度差、电位差)推动作用下，实现原料液中不同组分的分离、纯化和浓缩。依据膜孔的分子大小可分为微滤膜(MF) ,超滤膜}UF)、纳滤膜}NF)、反渗透膜(R(等。易克传等使用两级膜技术纯化了菊花总黄酮，先利用孔径为0.5 N,m的无机陶膜对菊花水提液进行除杂和澄清，再使用超滤膜，使水提液的总黄酮纯度达到19.81%，使用这种膜分离技术操作条件温和、分离效果较好。